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影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些?

更新時間:2022-08-19      點擊次數(shù):865
  細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應(yīng)用越來越廣泛。
  影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些?
  1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇
  不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要,因此在轉(zhuǎn)染實驗前應(yīng)根據(jù)實驗要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。
  每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),通過這些資料可選擇適合實驗設(shè)計的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然,適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑。
  2.細(xì)胞狀態(tài)
  一般低的細(xì)胞代數(shù)(<50)能確?;蛐筒蛔?。適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞生長旺盛,最容易轉(zhuǎn)染。
  細(xì)胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。也就是說同一種系的細(xì)胞株,在各實驗室不同培養(yǎng)條件下,其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變,導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。
  因此,如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低,可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)結(jié)果。
  3.轉(zhuǎn)染方法
  轉(zhuǎn)染時應(yīng)根據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法進(jìn)行,但也要根據(jù)實驗室的條件來確定轉(zhuǎn)染條件。
 ?。?)細(xì)胞培養(yǎng)物
  推薦在轉(zhuǎn)染前24小時分細(xì)胞,這將提供正常細(xì)胞代謝,增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細(xì)菌,支原體或真菌的污染。
 ?。?)細(xì)胞密度
  細(xì)胞密度對轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。如果選用新的細(xì)胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑,最好能夠進(jìn)行優(yōu)化實驗并為以后的實驗建立一個穩(wěn)定方法,包括適當(dāng)?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時間等等。
 ?。?)血清
  對于主流的轉(zhuǎn)染試劑來說,血清的存在不會影響轉(zhuǎn)染效率,甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率。
  不過要特別注意:對于RNA轉(zhuǎn)染,如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關(guān)注的。
  胎牛血清經(jīng)常用到,便宜一點的有馬或牛血清。通常的,血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,對不同細(xì)胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細(xì)胞生長,因此也會影響轉(zhuǎn)染效率。新加培養(yǎng)基的預(yù)熱對細(xì)胞轉(zhuǎn)染很有幫助。
 ?。?)氮磷(N/P)比
  N/P比是轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵(為了換算方便,一般以DNA/轉(zhuǎn)染試劑質(zhì)量比表示),在一定比例范圍內(nèi)轉(zhuǎn)染效率隨N/P比成比例增高,之后達(dá)到平值,但毒性也隨之而增加,因此在實驗之前應(yīng)根據(jù)推薦比例,確定本實驗的最佳轉(zhuǎn)染比例。
  (5)DNA質(zhì)量
  DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。應(yīng)盡可能提高DNA的純度。
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